巨噬细胞集落刺激因子/核因子kB受体激活物配体体外诱导培养高纯度破骨细胞:最佳剂量探讨

• 作者: 包洪卫 孙继芾 王青
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: M-CSF RANKL 破骨细胞 骨髓干细胞 骨组织工程
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 191-195
• 页数: 5页
• 分类号: R318
• 字数: 5813字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.02.001

摘要

背景:巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stlimulating factor,M-CSF)/核因子_kB受体激活物配体(receptor activatorof nuclear kappa B ligand,RANKL)两种细胞因子协同诱导骨髓干细胞形成破骨细胞是一种较新的,可以获取较高纯度和数量破骨细胞的诱导培养法,但尚缺乏统一的培养标准.目的:建立有效的M-CSF/RANKL诱导小鼠骨髓干细胞诱导分化破骨细胞的培养体系.方法:分离小鼠四肢骨获取骨髓干细胞.将小鼠骨髓干细胞在含有M-CSF的α-MEM培养基中培养24 h,调整细胞浓度为10~7,10~8,10~9L~(-1).然后在培养基中同时加入10μg/LM-CSF和不同质量浓度(20,50,100μg/L)RANKL.行抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察干细胞向破骨细胞的转变过程及细胞形态和染色情况,并对各组染色阳性的破骨细胞进行计数,比较不同诱导条件对破骨样细胞数量的影响. 结果与结论:培养3 d后可见少量破骨样细胞,胞质内含许多红色抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性颗粒,细胞内可见淡染的双核;培养6 d后可见大量染色阳性破骨样细胞;培养9 d后出现多核巨型染色阳性破骨样细胞,细胞明显增大,细胞核可达到3个以上.在固定细胞接种浓度条件下,RANKL质量浓度为100 μg/L时诱导分化形成的破骨样细胞数量较另两质量浓度增多(P<0.05);在固定RANKL质量浓度条件下,细胞浓度为10~5 L~(-1)时诱导分化形成的破骨样细胞数量较另两细胞接种浓度增多(P<0.05):细胞接种浓度为10~8L~(-1),RANKL质量浓度为100 μg/L时诱导分化形成的破骨样细胞数量高于其他条件组合(P<0.05).说明在M-CSF/RANKL诱导小鼠骨髓干细胞分化培养破骨细胞的体系中,RANKL最佳质量浓度为100 μg/L,最佳细胞接种浓度为10~8L~(-1).

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王青	南京医科大学第一附属医院骨科	40	461	12.0	20.0
2	包洪卫	靖江市人民医院骨科	11	52	4.0	7.0
3	孙继芾	南京医科大学第一附属医院骨科	2	10	1.0	2.0