siRNA干扰SLC7a8对NRK-52E细胞摄取左旋多巴的影响

• 作者: 周希 张怀勤 张敏 施翔翔 杨德业 黄晓燕 黄芳
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 基因,SLC7a8 高血压 肾小管上皮细胞 左旋多巴
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 504-508
• 页数: 5页
• 分类号: R544.1|R394.1
• 字数: 3429字
• 语种: 中文

摘要

目的:通过RNA干扰(RNAi)技术选择性下调高血压相关基因SLC7a8的表达,探讨对大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)摄取左旋多巴的影响.方法:设计并合成3个针对大鼠SLC7a8基因的特异性siRNA片段(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3),以含非特异性编码序列的siRNA-con为对照.将上述3个片段及阴性对照通过阳离子脂质体法转染至NRK-52E内,通过流式细胞仪估算转染效率后经RT-PCR初步筛选高效率干扰片段,用Western blotting检测蛋白水平的干扰效率,采用紫外分光光度法检测空白对照组(blank)、siRNA-con转染组和SLC7a8基因特异性沉默组不同时点(6、12、24、36、48、60、72、120 min) NRK-52E内左旋多巴的浓度.结果:流式细胞仪测定siRNA转染NRK-52E效率为94%,RT-PCR初步筛选结果显示siRNA-1、3干扰效率较高,Western blotting检测显示siRNA-3组在蛋白水平的干扰效率较高,而对照组siRNA-con与空白对照组(blank)的SLC7a8 表达差异不明显.通过紫外分光光度法检测NRK-52E对左旋多巴的吸收结果显示干扰组不同时点(6、12、24、36、48、60、72、120 min)细胞内左旋多巴浓度均低于siRNA-con转染组和空白对照组;对照组siRNA-con与空白对照组相比则无明显差异.结论:RNA干扰技术能选择性下调大鼠肾小管上皮细胞SLC7a8的表达水平;SLC7a8基因特异沉默后NRK-52E对左旋多巴的摄取在各个不同时点(6、12、24、36、48、60、72、120 min)均降低.