日本血吸虫酪氨酸羟化酶基因的克隆、真核表达及鉴定

• 作者: 刘丽丽 周银娣 徐元宏 沈继龙 石杜娟 罗庆礼 胡元生 钟政荣
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 日本血吸虫 酪氨酸羟化酶 真核表达
• 年，卷（期）: 2010,（12）
• 页码范围: 1114-1117
• 分类号: R383.2
• 字数: 3750字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2010.12.008

摘要

目的 扩增日本血吸虫的酪氨酸羟化酶(Schistosoma japonicum Tyrosine Hydroxylase,SjTH)编码基因,构建pcDNA3.1(+)-SjTH真核表达载体,并检测其在COS-7细胞中的表达情况.方法 以日本血吸虫成虫cDNA为模板,RACE PCR扩增SjTH编码基因,并与pGEM-T连接进行亚克隆,双酶切后回收目的基因,并与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,PCR和双酶切初步鉴定后测序,纯化无内毒素重组质粒pcDNA3.1(+)-SjTH,转染入COS-7细胞,G418筛选阳性克隆,RT-PCR和Western blot鉴定重组SjTH蛋白的表达.结果 RACE PCR 扩增出SjTH编码基因,大小约1 392bp,经双酶切鉴定、测序及Blast分析鉴定重组真核质粒构建成功.脂质体介导无内毒重组真核质粒pcDNA3.1(+)-SjTH转染入COS-7细胞,G418筛选出阳性克隆,RT-PCR证实阳性单克隆细胞带有SjTH编码基因,Western blot鉴定单克隆细胞表达重组SjTH蛋白,大小约54kD.结论 真核表达载体pcDNA3.1(+)-SjTH构建成功,G418筛选出阳性克隆,真核表达重组SjTH蛋白,为后续研究SjTH蛋白功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐元宏	安徽医科大学第一附属医院检验科	281	2373	24.0	32.0
2	钟政荣	安徽医科大学人兽共患病研究所	5	22	3.0	4.0
3	罗庆礼	安徽医科大学人兽共患病研究所	25	87	6.0	7.0
4	胡元生	安徽医科大学第三附属医院检验科	8	45	3.0	6.0
5	石杜娟	安徽医科大学第一附属医院检验科	1	1	1.0	1.0
6	周银娣	安徽医科大学第三附属医院检验科	3	2	1.0	1.0
7	刘丽丽	安徽医科大学人兽共患病研究所	1	1	1.0	1.0