pEGFP-C2/LAT-ORF3真核表达载体的构建及其在Vero细胞中的表达

• 作者: 杨慧兰 薛礼长
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 医学
• 关键词: 单纯疱疹病毒Ⅱ型 pEGFP-C2质粒 LAT ORF3 真核表达载体 Vero细胞
• 年，卷（期）: 2010,（11）
• 页码范围: 157-161
• 分类号: R3
• 字数: 3629字
• 语种: 中文

摘要

克隆单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virus Ⅱ,HSV-2)潜伏相关转录体(latency associated transcript,LAT)第3个开放阅读框(open reading frame 3,ORF3)的DNA序列,构建pEGFP-C2/LAT-ORF3真核表达载体,并观察其在非洲绿猴肾细胞(Vero)中的表达,为进一步研究LAT基因及ORF3的生物学功能奠定基础.用HSV-2 333株感染Vero细胞,从Vero细胞培养液中收集HSV-2并提取HSV-2基因组.以HSV-2基因组为模板,PCR扩增得到HSV-2 LAT ORF3 DAN片段.将ORF3片段连接到pEGFP-C2质粒上,用卡那霉毒筛选阳性克隆,经菌落PCR,双酶切及测序验证pEGFP-C2/LAT-ORF3真核表达载体构建成功.用Xfect转染试剂将重组载体转染入Vero细胞,倒置荧光显微镜观察其在Vero细胞中的表达.双酶切及测序结果验证ORF3片段正确插入pEGFP-C2质粒,荧光显微镜观察到融合蛋白在转染的Vero细胞中的表达.成功构建pEGFP-C2/LAT-ORF3真核表达载体,该重组质粒能在Vero细胞中成功表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨慧兰	中国人民解放军广州军区广州总医院皮肤科	14	73	4.0	8.0
2	薛礼长	华南理工大学生物科学与工程学院	4	1	1.0	1.0