对比研究两种腺病毒载体对大鼠骨髓间充质干细胞的转染效率及机制

• 作者: 余剑英 兰晓莉 张永学 熊玲静 胡硕
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 转染 腺病毒 大鼠
• 年，卷（期）: 2010,（15）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1057-1061
• 分类号: R3
• 字数: 3632字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2010.15.014

摘要

目的 对比研究两种腺病毒载体Ad5/EGFP和AdF35/EGFP转染SD大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSC)的效率及其机制.方法 用密度梯度法从大鼠骨髓中分离出rBMSC,流式细胞仪检测其表面相关标志抗原(CD90、Cd29、CD44、CD34、CD11b和CD45)以鉴定rBMSC.用不同梯度感染复数(MOI)的Ad5/EGFP和AdF35/EGFP分别转染rBMSC,MTT检测二者对rBMSC生长的影响.转染后第1～9天,荧光显微镜下观察转染情况,同时流式细胞仪检测转染效率及平均荧光强度,实时PCR检测rBMSC表面CAR及CD46的表达水平.结果 rBMSC表达CD90、Cd29、CD44阳性,而CD34、CD11b、CD45表达为阴性.MOI≤1600时,Ad5/EGFP对rBMSC的生长无明显抑制作用(t=3.12,P=0.052);MOI≤1000时,AdF35/EGFP对rBMSC的生长无明显抑制作用(t=2.20,P=0.15)).荧光显微镜下,Ad5/EGFP转染rBMSC 1 d后即可见大量EGFP表达阳性的细胞,第2～3天阳性细胞数最多,随后减少,第9天仍可见少量的阳性细胞.AdF35/EGFP转染rBMSC后1～9 d EGFP阳性细胞数始终很少.Ad5/EGFP的转染效率显著性高于AdF35/EGFP的转染效率(t=2.45,P=0.008).经实时PCR检测,rBMSC高度表达CAR,而极低表达CD46,二者之间差异有统计学意义(t=2.57,P＜0.01).结论 Ad5/EGFP对rBMSC的转染效率明显高于AdF35/EGFP,这可能与rBMSC表面高表达CAR而极低表达CD46有关.AdF35不合适作为目的 基因转染rBMSC的载体,Ad5可作为目的 基因有效转染rBMSC的载体,这为后续目的 基因转染rBMSC治疗各种疾病的实验研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张永学	华中科技大学同济医学院附属协和医院核医学科	77	306	8.0	15.0
2	胡硕	华中科技大学同济医学院附属协和医院核医学科	2	10	2.0	2.0
3	熊玲静	中南大学湘雅医院核医学科	12	33	4.0	5.0
4	兰晓莉	华中科技大学同济医学院附属协和医院核医学科	25	41	3.0	5.0
5	余剑英	中南大学湘雅医院核医学科	17	173	6.0	12.0