bmi-1shRNA逆转录病毒表达载体的构建及稳定转染LoVo细胞系的建立

• 作者: 朱晓莹 汪云霞 王晓华 魏亚明 黄颖烽
• 来源期刊: 肿瘤防治研究
• 学科: 生物学
• 关键词: bmi-1基因 RNA干扰 结肠癌细胞 转染 短发夹RNA
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 269-273
• 页数: 5页
• 分类号: Q735.3~+5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3971/j.issn.1000-8578.2010.03.007

摘要

目的 构建针对原癌基因bmi-1的shRNA逆转录病毒表达载体,建立稳定转染的LoVo细胞系,探讨稳定转染bmi-1shRNA对大肠癌细胞LoVo靶基因表达的影响,为下一步应用RNAi技术治疗打下基础.方法 设计合成靶向bmi-1基因编码短发夹RNA的两条寡核苷酸序列,另设计无义对照序列,构建重组载体pSIREN-bmi-1及pSIREN-bmi-1-C,载体经脂质体2000介导转染LoVo细胞,通过嘌呤霉素筛选,建立稳定转染的LoVo细胞系,显微镜观察、MTT检测、荧光定量PCR、Western blot检测bmi-1表达受抑后对细胞的增殖影响.结果 成功构建了针对bmi-1基因的shRNA表达载体,建立了稳定转染的LoVo细胞系,bmi-1shRNA对LoVo细胞bmi-1 mRNA表达抑制率为80%、bmi-1蛋白抑制率为82%,P<0.05.结论 针对bmi-1基因的shRNA表达载体能够明显抑制结肠癌细胞LoVo的增殖能力,bmi-1 mRNA与蛋白表达受抑制,但对细胞形态学无明显影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汪云霞	广州医学院生化教研室	4	9	2.0	3.0
2	王晓华	广州医学院生化教研室	24	130	7.0	10.0
3	魏亚明	广州医学院附属广州市第一人民医院中心实验室广州市临床医学研究所	19	130	4.0	11.0
4	黄颖烽	广州医学院附属广州市第一人民医院中心实验室广州市临床医学研究所	9	18	3.0	3.0
5	朱晓莹	广州医学院生化教研室	4	10	2.0	3.0