鼻咽癌细胞中增强型表达载体调控TK基因与端粒酶活性关系的研究

• 作者: 关小芳 文忠 牟少凤 申聪香 钱宇虹
• 来源期刊: 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 鼻咽肿瘤 增强型表达载体 TK基因 端粒酶
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 168-173
• 页数: 6页
• 分类号: R739.63
• 字数: 4735字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-1781.2010.04.009

摘要

目的:探讨人端粒酶催化亚单位(hTERT)基因核心启动子和原核增强子CMV联合调控单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/更昔洛韦系统对TK基因的活性改变及与鼻咽癌细胞中端粒酶活性的关系.方法:将改良构建后的增强型载体pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp-CMV enhancer及单启动子载体pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp(作为对照组)分别转染端粒酶阳性的人鼻咽癌5-8F细胞株及对照组细胞人乳腺癌MCF-7细胞(端粒酶阳性)及正常人血管内皮ECV细胞(端粒酶阴性),采用荧光显微镜下观察其TK基因绿色荧光蛋白表达,实时荧光定量PCR方法检测转染细胞中TK基因mRNA定量表达差异,TRAP银染法检测肿瘤细胞转染前后端粒酶活性改变并分析TK基因表达与端粒酶活性之间的关系.结果:①增强型表达载体转染鼻咽癌5-8F细胞及乳腺癌MCF-7细胞均有很强的荧光表达及TK基因的mRNA表达,比单启动子pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp及ECV细胞绿色荧光要强.实时荧光定量PCR显示,增强型载体组A值亦较对照组明显增高.②转染增强型载体(加GCV)后TRAP银染法检测鼻咽癌5-8F细胞端粒酶活性较转染前明显降低,但转染正常对照细胞后活性无变化.③加入GCV后,pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp-CMV enhancer对鼻咽癌5-8F细胞及乳腺癌MCF-7细胞体外增殖均有明显抑制作用,高于单启动子组pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp及空载体组pGL3-basic- EGFP3及空白对照组,而pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp-CMV enhancer转染ECV细胞无明显抑制作用.结论:hTERT启动子及CMV增强子可明显增强TK基因活性,并可导致该种肿瘤细胞端粒酶活性降低,靶向杀灭该种肿瘤细胞,但这种由TK基因介导的端粒酶活性抑制机制尚不清楚.