香蕉束顶病毒海口分离物CP基因的原核表达、纯化及其抗血清制备

• 作者: 余乃通 冯团诚 刘志昕 张雨良 王健华
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 香蕉束顶病毒 GP基因 原核表达 纯化 抗血清
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 767-771
• 分类号: S46
• 字数: 3528字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2010.05.014

摘要

用PCR方法从感染香蕉柬顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)的香蕉植株幼嫩假茎和叶片总DNA中扩增外壳蛋白(coat protein,CP)基因.回收目的片段,经Xho Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后与同样酶切的质粒载体pET30a(+)相连接,酶切验证及测序结果获得了含BBTV CP基因的重组质粒pET30a-CP.将重组质粒转化Codon plus表达菌,在25℃、0.4mmol/L IPTG条件下诱导6 h或过夜,经12%SDS-PAGE电泳分析可知,该莺组菌表达了一个与预期分子量大小一致的His-CP融合蛋白,约为30 ku,且主要以包涵体的形式存在.多次洗涤包涵体后得到高纯度的融合蛋白,用其免疫家兔,获得BBTV CP蛋白抗血清.间接EUSA法测定抗血清效价大于51 200.Westem blot分析表明,抗血清能与融合蛋白特异性结合.