常氧条件下同时表达突变型低氧诱导因子1α目的蛋白和人源化绿色荧光蛋白报告分子腺病毒真核表达载体的构建

• 作者: 刘丹平 李谌 王国贤 胡亮
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 低氧诱导因子1α 基因突变 重组腺病毒载体 绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2010,（20）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 3787-3792
• 分类号: R318
• 字数: 927字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.20.041

摘要

背景:低氧诱导因子1能够调控多种基因共同表达,在骨缺损部位可诱导生理功能完整的新血管生成.目的:构建能够同时表达突变型低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α)目的蛋白和人源化绿色荧光蛋白(human renilla reniformis green fluorescent protein,hrGFP)报告分子的新型腺病毒真核细胞表达载体.方法:对目的基因供体质粒pCMV6-XL5-HIF1α携带的人低氧诱导因子1α基因进行测序和对其序列内部限制性内酶识别位点进行分析,利用PCR(poly-merase chain reaction,PCR)技术定点突变低氧诱导因子1α基因编码区的第402位、564位和803位氨基酸,酶切、测序检测突变情况,将正确突变后的低氧诱导因子1α基因(突变mutagenesis,突变后的HIF-1α基因写作HIF-1αmu)定向连入腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV-IRES-hrGFP-1中.携带HIF-1αmu基因的重组腺病毒穿梭载体经测序鉴定、Pme I酶切线性化后转化BJ5183-AD-1电感受态细胞,利用细菌内同源重组机制将HIF-1αmu和人源化绿色荧光蛋白基因连同其顺势表达元件重组入腺病毒基因组质粒,通过Pac I酶切及测序鉴定获得重组体.结果与结论:经基因测序证实,HIF-1α基因编码区的第402位、564位和803位氨基酸均定点突变成丙氨酸.经酶切鉴定及测序证实,重组腺病毒表达载体构建成功.结果表明,成功构建了新型重组腺病毒突变型真核细胞表达载体pAd-HIF1αmu-IRES-hrGFP-1.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘丹平	辽宁医学院附属第一医院骨关节外科	61	259	9.0	13.0
2	李谌	辽宁医学院附属第一医院骨关节外科	22	51	4.0	6.0
3	王国贤	辽宁医学院附属第一医院骨关节外科	44	198	8.0	10.0
4	胡亮	辽宁医学院附属第一医院骨关节外科	5	11	2.0	3.0