白杨素提高肿瘤坏死因子-α诱导肝癌细胞HepG2凋亡能力的研究

• 作者: 古梅英 李欣 杨杏芬 杨颖 熊习昆 王凤岩 王剑宁 陈美芬 黄俊明
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 白杨素 肿瘤坏死因子(TNF-α) 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2010,（11）
• 所属期刊栏目: 药理与临床
• 页码范围: 1828-1834
• 分类号: R286.91
• 语种: 中文

摘要

目的 研究白杨素提高肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肝癌细胞HepG2凋亡的能力,并对其分子机制进行初步探讨.方法 白杨素以不同浓度(10、20、40μmol/L)单独或联合TNF-α(10 ng/mL)处理HepG2细胞后,于普通及荧光倒置显微镜下观察细胞形态变化,获得细胞死亡的定性资料;流式细胞术检测sub-G1峰,分析峰值变化规律,获得细胞死亡的定量资料;并以Western blotting方法检测凋亡标志蛋白easpase-3、caspase-8和PARP原蛋白和相应的裂解产物的变化情况及凋亡抑制蛋白Bcl-xL、cIAPs、xIAP、cFLIP的时间一效应变化规律.结果 形态学观察可发现白杨素联合TNF-a处理HepG2细胞后,与对照组比较细胞出现明显的死亡数量增加,而单独白杨素组、TNF-a组与对照组比较则未观察到明显的细胞减少(P>0.05);流式细胞术分析sub-G1的定量资料也支持这一结果,联合处理组sub-G1值随着白杨素剂量增加而增大,最高达到(27.84±0.54)%,与对照组比较有显著差异(P＜0.05),Hochest 33342荧光染色在联合处理组可观察到明显的核固缩细胞增加;Western blotting检测到凋亡标志蛋白caspase-3、caspase-8和PARP原蛋白减少、相应的活化裂解片段出现;全caspase酶抑制剂z-VAD-fmk可有效抑制联合处理组HepG2细胞死亡、sub-G1峰消失比值减少,阻止凋亡标志蛋白caspase-3、caspase-8和PARP的活化降解;TNF-a引起的凋亡抑制蛋白cFLIP-1表达量增加,随联合处理时间延长而明显下调,与对照组比较有明显差异,Bcl一xL、xIAP等其他凋亡抑制蛋白没有明显改变.结论 白杨素能够有效提高TNF-α诱导HepG2细胞凋亡的能力,NF-kB调节的凋亡抑制蛋白cFLIP-1表达减少是其重要的分子机制.