重组腺病毒pAdxsi-eGFP-rNIS的构建及初步应用

• 作者: 张永学 李崇佼 柴文文 胡硕 覃春霞 赵敏 陈荃
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: rNIS 基因重组 腺病毒 肿瘤
• 年，卷（期）: 2010,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1008-1011,1015
• 页数: 5页
• 分类号: Q782
• 字数: 3290字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建包含rNIS和eGFP基因的重组腺病毒栽体及初步应用.方法 以CMV为启动子,将pShuttle-eGFP-CMV重组穿梭载体和含有目的 基因rNIS的原始质粒酶切后,电泳、切胶回收,分别得到载体片段和插入片段.连接酶连接两种片段后,转化化学感受态DH5a菌株,涂布到抗性固体培养基中;挑取单克隆菌落,接种到抗性液体培养基培养;提取pShuttle-eGFP-CMV-rNIS重组穿梭质粒,酶切鉴定.用类似的方法将pShuttle-eGFP-CMV-rNIS重组穿梭质粒转移到pAdxsi重组腺病毒骨架栽体上.在细菌内扩增培养后,提取pAdxsi-eGFP-rNIS病毒质粒,酶切鉴定.将最终的重组腺病毒Ad-eGFP-rNIS转染到A549细胞,荧光显微镜下观察、拍照;细胞与125I溶液培养后,γ计数器检测细胞放射性计数.结果 rNIS构建到pShut-tle-eGFP-cMV(-)TEMP重组穿梭质粒中,并成功转移到pAdxsi重组腺病毒骨架载体上,经酶切鉴定,rNIS和eGFP均表达正确.荧光显微镜下,转染Ad-eGFP-rNIs的A549细胞可见大量强烈绿色荧光,未转染细胞未见明显绿色荧光.转染细胞摄取放射性计数为(29 250±1 441)cpm,未转染细胞摄取放射性计数为(490±27)cpm,两者之间的差异有统计学意义,t=15.2,P<0.001.结论 成功构建了含rNIS基因的重组腺病毒载体,转染肿瘤细胞后rNIS功能正常,为下一步rNIS介导的肿瘤基因靶向治疗及分子显像奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡硕	中南大学湘雅医院核医学科	18	99	5.0	9.0
2	张永学		77	306	8.0	15.0
3	赵敏	中南大学湘雅医院核医学科	21	49	4.0	5.0
4	柴文文	中南大学湘雅医院核医学科	5	13	2.0	3.0
5	覃春霞	华中科技大学同济医学院附属协和医院核医学科	3	10	2.0	3.0
6	李崇佼	华中科技大学同济医学院附属协和医院核医学科	1	2	1.0	1.0
7	陈荃	华中科技大学同济医学院附属协和医院核医学科	1	2	1.0	1.0