γ射线预处理制备胚胎干细胞滋养层的实验研究

• 作者: 刘尧 李红丽 杨卫兵 杨明 王惠 秦茂林
• 来源期刊: 医学研究杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 小鼠胚胎成纤维细胞(MEF) 胚胎干细胞(ESC) 滋养层 60Coγ 射线
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 33-37,126
• 分类号: R3
• 字数: 4978字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-548X.2010.04.012

摘要

目的 筛选并建立稳定、高效的胚胎干细胞滋养层细胞体外培养的最佳条件,利于胚胎干细胞的培养. 方法 清洁级昆明系孕12.5天、14.5天、18.5天雌鼠和新生(P0)昆明小鼠各5只.无菌取上述各孕龄小鼠胚胎分离培养原代鼠胚成纤维细胞(MEF)并传代;以60Coγ射线(30Gy,20℃)分别照射10、20、25min后制备滋养层细胞. 结果 胚龄及60Coγ射线照射对MEF的细胞活性、生长增生和分泌功能有影响.(1)细胞活性状态:①E12.5天、E14.5天、E18天鼠胚和P0来源的第3～5代MEF活性均较好.E18.5天鼠胚和P0来源的第6代MEF,后期深染变形细胞的比例增多达32%,与E14.5天鼠胚来源同代细胞相比有显著差异(P<0.05);②E14.5天来源的第3～6代细胞采用60Coγ射线照射10min组,细胞仍生长迅速.照射20min组,细胞可维持存活达20天以上,细胞密度无显著变化.照射25min组,细胞存活14天左右且细胞密度无显著增加.(2)细胞分泌功能:①E14.5天鼠胚来源的第3～6代MEF以及用60Coγ射线照射10min组和20min组并培养5天时均可见较多数目的Ⅰ型胶原蛋白免疫阳性细胞,且染色较深;②60Coγ射线照射25min组,培养5天后第3～4代MEF中Ⅰ型胶原蛋白阳性细胞数目与正常组相比无明显差异;但第5代后MEF中Ⅰ型胶原蛋白阳性细胞数目减少,染色浅淡. 结论 E14.5天鼠胚来源的第3～6代是用于制备滋养层的最佳来源;60Coγ射线(30Gy,20℃)照射20min可作为预处理制备滋养层细胞的最佳条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨明	解放军第一八一医院皮肤科	96	343	9.0	14.0
2	王惠	解放军第一八一医院皮肤科	50	183	8.0	10.0
3	杨卫兵	解放军第一八一医院皮肤科	16	30	3.0	4.0
4	秦茂林	解放军第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室	3	5	2.0	2.0
5	刘尧	解放军第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室	1	2	1.0	1.0
6	李红丽	解放军第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室	5	13	3.0	3.0