Ana-1巨噬细胞分泌exosomes的提取及免疫鉴定

• 作者: 刘爱林 周向梅 周海云 尹晓敏 张交儿 杨利锋 王桂花 赵德明
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 农学
• 关键词: Ana-1巨噬细胞 小囊泡 免疫胶体金 免疫印迹
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 84-85,88
• 分类号: S852
• 语种: 中文

摘要

目的:为了证实Ana-1巨噬细胞是否分泌exosomes.方法:采用分级离心的方法,从Ana-1巨噬细胞培养的上清液提取exosomes.样品用醋酸双氧铀负染,在透射电镜下观察其形态、大小;并分别用Flotillin多克隆抗体、Tsg101单克隆抗体(mAb)、Hsp70 mAb和calnexin多克隆抗体,通过免疫印迹法和免疫金标记法进行免疫鉴定.结果:电镜下可以观察到提取的exosomes平均大小为50～100 nm.免疫印迹法分析结果显示,提取的exosomes表达Flotillin、Tsg101和Hsp70蛋白,相对分子质量(Mr)分别为45 000、43000和70000,但不表达calnexin蛋白;免疫电镜分析显示exosomes膜表面和内部有明显的金颗粒.结论:Ana-1巨噬细胞分泌exosomes.