一种适宜拟南芥PCR检测的DNA提取方法

• 作者: 孟静静 徐平丽 李保龙 李新国 赵晋平 郭峰
• 来源期刊: 农业科学与技术（英文版）
• 学科: 农学
• 关键词: 拟南芥 PCR DNA快速提取
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 页码范围: 41-42,155
• 分类号: S6
• 字数: 1199字
• 语种: 英文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-4229-B.2010.03.012

摘要

[目的]介绍一种适于拟南芥PCR检测的DNA快速提取方法.[方法]通过对常规DNA提取方法的改进(省去液氮研磨和苯酚提取的步骤),获得可以快速大批量地提取拟南芥DNA样品的方法.于1.5 ml Eppendorf管内加入400 μl DNA提取液[内含200 mmol/L Tri(pH值7.5),25 mmol/L EDTA(pH值8.0),250 mmol/L NaCl,0.5% SDS(W/V)],剪取拟南芥叶片材料少许(1片以下)加入400 μl DNA提取液,用微型研磨棒将叶片捣碎至溶液成绿色,放置3～5 min;加入400 μl 氯仿/异戊醇(体积比24∶1),混合均匀,12 000 r/min离心5 min;取上清液至另一1.5 ml Eppendorf管内,加入300 μl异丙醇,颠倒混合均匀,室温下放置5 min,12 000 r/min离心5 min;弃去上清液,以70%乙醇漂洗,放置晾干,加入100 μl灭菌超纯水溶解,4 ℃放置备用.以随机抽取的拟南芥转基因株系和突变株系为样品进行验证.[结果]经过琼脂糖凝胶电泳及紫外吸收检测,DNA样品完整且污染少,PCR扩增目的片段结果良好,适于作为PCR反应的模板.经过对随机抽取的拟南芥转基因株系和突变株系的PCR检测,阳性植株目的基因扩增条带清晰,无假阳性,试验结果理想.[结论]该方法适用于拟南芥DNA样品的快速提取、PCR检测及拟南芥突变体筛选工作.