1.1倍长乙型肝炎病毒基因组在Huh7细胞中的高效复制和表达

• 作者: 刘妍 刘文 徐东平 施建飞 李兰兰 蒋林彬 钟彦伟
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎病毒,乙型 基因组 病毒复制 基因表达
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 所属期刊栏目: 乙肝病毒耐药检测专题研究
• 页码范围: 635-638
• 分类号: R512.63
• 语种: 中文

摘要

目的 构建乙型肝炎病毒(HBV)1.1倍基因组长度的重组载体,研究其在人肝癌细胞系Huh7中的复制与表达.方法 以慢性乙型肝炎患者C基因型HBV DNA为模板,用聚合酶链反应(PCR)扩增出HBV基因组的两条DNA片段,酶切后与载体连接成含HBV 1.1倍基因组长度的重组载体.经PCR、酶切及测序鉴定后,将重组载体经FuGENE(R) HD转染入Huh7细胞,用ELISA检测转染细胞培养上清液的HBsAg和HBeAg表达,用荧光定量FCR和Southern杂交检测HBV DNA的复制水平及复制中间体.结果 经鉴定证实成功构建1.1倍基因组长度C基因型HBV重组载体,体外转染Huh7细胞48h后,培养上清液中检出HBsAg和HBeAg表达;转染72h后,荧光定量PCR检出较高的HBV DNA复制水平(107～109拷贝/ml);Southern杂交检出病毒复制中间体.结论 构建的1.1倍长重组载体可以介导高水平的HBV病毒复制和基因表达,为进一步体外瞬时转染HBV表型耐药分析奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钟彦伟	解放军302医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室	18	141	7.0	11.0
2	刘妍	解放军302医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室	13	95	6.0	9.0
3	施建飞	解放军302医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室	2	10	1.0	2.0
4	刘文	解放军302医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室	3	10	1.0	3.0
5	蒋林彬	解放军302医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室	1	9	1.0	1.0
6	李兰兰	解放军302医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室	1	9	1.0	1.0