甘菊DFL::EGFP高效融合蛋白表达载体的构建

• 作者: 付建新 戴思兰 王翊
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 农学
• 关键词: 小片段克隆 粘性末端PCR 表达载体构建 LFY启动子 DFL:EGFP融合蛋白
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 102-108
• 页数: 7页
• 分类号: S6
• 字数: 5241字
• 语种: 中文

摘要

增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)是一种优化的突变型GFP,DFL是从甘菊中分离出的LFY基因的同源序列.为了研究DFL基因的功能和表达模式,研究利用小片段克隆法将linker序列插入到EGFP基因5'端启始密码子前面,在pBI121载体的CaMV35S启动子的3'端后面插入一段多克隆位点,威功地构建了pBI-DFL-EGFP表达载体.通过设计特异引物,利用PCR技术扩增得了到拟南芥LFY基因的启动子序列,用粘性末端PCR技术将pBI-DFL-EGFP表达载体中CaMV35S启动子替换成LFY基因启动子,构建成了pLFY-DFL-EGFP表达载体.用舍有pBI-DFL-EGFP和pLFY-DFL-EGFP质粒的农杆菌侵染洋葱表皮细胞,在荧光显微镜下分别用蓝光激发,均观测到了荧光.这一结果表明,融合蛋白DFL::EGFP表达载体构建成功,同时还证明了通过PCR技术克隆到的LFY启动子序列具有启动子功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	戴思兰	北京林业大学园林学院	126	3014	30.0	50.0
2	付建新	北京林业大学园林学院	8	93	5.0	8.0
3	王翊	北京林业大学园林学院	6	84	3.0	6.0