脐血混合培养纯化人间充质干细胞及生物学特性研究

• 作者: 刘赴平 崔四平 师玲玲 幺俊卿 王德文 许惠芯 陈少彬
• 来源期刊: 中国输血杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人类脐血间充质干细胞 体外分离 混合培养 单个核细胞 生物学特性
• 年，卷（期）: 2010,（12）
• 页码范围: 1029-1033
• 分类号: R446.11+3|R458+8
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨体外分离、混合培养纯化人脐血间充质干细胞的适宜体系,观察该人脐血间充质干细胞生物学特性.方法 收集孕足月新生儿脐血,每3份脐血[(70-100)mL/份]混合;采用1.077 g/ml的淋巴细胞分离液(Ficoll)以1 500 r/min密度梯度离心法分离脐血中的单个核细胞,在Mesencult培养基中贴壁培养筛选人脐血闻充质干细胞,显微镜下观寨细胞生长形态变化,细胞计数并绘制细胞生长曲线,沈武细胞仪检测细胞抗原表达,分析细胞周期;体外诱导脐血间充质干细胞成脂、成骨分化.结果 密度梯度离心法所获得的单个核细胞,在培养基中培养约3-5 h开始出现贴壁生长,24 h后贴壁细胞增多,呈明显纺锤状,10 d后开始出现细胞克隆,3周后呈漩涡状生长.原代培养时间为15 d,P1代倍增时间为26 h.流武细胞仪鉴定:贴壁生长的细胞表达CD29、CD44和CD105,不表达CD34、CD45.分化潜能鉴定体外培养细胞可以成脂、成骨分化.结论 所贴壁培养出的细胞的生长形态、流式表形、分化潜能具有人脐血间充质干细胞生物学特征,混合培养可以提高间充质干细胞培养成功率,实验中采用的培养体系适宜人脐血间充质干细胞的分离培养.