病毒负性调节因子在内皮细胞稳定表达细胞株的建立

• 作者: 刘朝奇 李斌 杨凡 覃晓琳 韩钰
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: HIV-1 Nef基因 稳定表达 血管内皮细胞
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 161-164,197
• 页数: 5页
• 分类号: Q2
• 字数: 3903字
• 语种: 中文

摘要

建立HIV-1的调节基因Nef基因在内皮细胞稳定表达的细胞株ECV304-Nef,为研究Nef对血管内皮细胞生物学活性的影响奠定试验基础.构建真核表达载体pcDNA 3.1(+)-Nef,将其质粒和pcDNA 3.1(+)质粒(阴性对照)分别转染血管内皮细胞ECV304,G418筛选.通过RT-PCR检测Nef mRNA在细胞中的表达;细胞免疫荧光法检测Nef蛋白的表达及定位;Western blotting检测Nef蛋白的特异性表达,获得稳定表达的细胞株.构建的重组质粒pcDNA3.1(+)-Nef经BamH I和EcoR I双酶切鉴定,得到的片段大小与理论值相符,分别为载体的5 400 bp和目的基因的621 bp.测序结果显示碱基序列与GenBank(登录号:K03455)序列相同.转染细胞经G418筛选后获得稳定表达Nef的ECV304细胞株,RT-PCR显示转染pcDNA 3.1(+)-Nef质粒的ECV304细胞出现621 bp条带,对照组无目的条带出现;荧光显微镜下观察转染pcDNA 3.1(+)-Nef质粒的ECV304细胞表达的Nef蛋白主要定位于细胞质中.Western blotting结果显示,转染pcDNA 3.1(+)- Nef质粒的ECV304细胞约27 kD处检测到目的条带,表明pcDNA3.1(+)-Nef表达正确.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩钰	三峡大学分子生物学研究所	71	175	7.0	9.0
2	刘朝奇	三峡大学分子生物学研究所	171	552	10.0	15.0
3	杨凡		22	47	4.0	6.0
5	覃晓琳	三峡大学分子生物学研究所	23	62	4.0	7.0
8	李斌	三峡大学分子生物学研究所	20	89	4.0	9.0