靶向hTERT基因的microRNA前体质粒抑制鼻咽癌细胞生长的体内实验研究

• 作者: 危维 唐瑶云 张俊毅 王承龙 蔡鑫章 贺楚峰 赵素萍
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人端粒酶逆转录酶 鼻咽癌 BAT干扰 microRNA
• 年，卷（期）: 2010,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1314-1319
• 页数: 6页
• 分类号: R739.6
• 字数: 4819字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建并筛选靶向人端粒酶逆转录酶基因的microRNA前体(pre-microRNA)质粒,通过体内实验验证该质粒对鼻咽癌CNE-2细胞生长的抑制作用.方法 设计3对针对hTERT基因不同位点的pre-microRNA(茎环结构的前体)片段,构建携带比序列的真核表达质粒(pre-miR-Htert1-3)并测序鉴定.脂质体法瞬时转染重组质粒到鼻咽癌CNE-2细胞,采用pre-time RT-PCR筛选出对hTERT基因表达抑制作用最强的质粒;在稳定转染的CNE-2细胞中,用软琼脂集落形成实验和Western blot进一步确认该质粒作用;在裸鼠体内实验中,观察肿瘤生长情况,并以免疫组化检测肿瘤中hTERT的表达.结果 重组质粒经测序证实构建成功.与PBS组相比,3种质粒分别使hTERT基因mRNA水平下降77.3%、15.1%和9.5%;筛先的出pre-miR-Htert1在稳定转染的CNE-2细胞中,使细胞hTERT蛋白下调、细胞集落形成能力下降;建立了人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,发现pre-miR-Htert1对裸鼠移植瘤生长抑制率为64.8%,并且使肿瘤内hTERT表达下降.结论 成功构建并筛选出靶向hTERT基因的pre-microRNA真核表达质粒,通过体外和体内实验证实,该质粒对鼻咽癌CNE-2细胞内的hTERT 基因表达具有明显抑制作用,并且有效抑制了肿瘤的生长.