小鼠NF-κ B p65亚基真核表达质粒的构建

• 作者: 周建大 彭浩 徐阳成 李雄 欧阳华伟 罗成群 贺全勇 陈铁夫
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 核因子κB pcDNA3.1(一) 表达质粒
• 年，卷（期）: 2010,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1281-1283,1288
• 页数: 4页
• 分类号: R-332
• 字数: 2581字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建小鼠NF-κ B p65亚基真核表达质粒.方法 从培养的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7中提取总RNA,逆转录得到DNA,利用PCR方法钓取目的 基因,将目的 基因与目的 载体pcDNA3.1(一)分别进行酶切.酶切产物电泳回收后进行定向连接,其产物转化细菌感受态.对长出的克隆先进行菌落PCR鉴定,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和比对分析,比对正确的即为构建成功的目的质粒.结果 经过PCR鉴定和酶切鉴定,证实DNA片段长度和序列正确.结论 通过RT-PCR克隆出小鼠NF-κ B p65亚基基因,并成功连接于目的载体,为进一步研究NF-κ B p65的烧伤后免疫反应中的作用机制打下实验基础.