不同功能状态滋养层对人胚胎生殖嵴干细胞生长作用的实验研究

• 作者: 刘尧 李丽君 李欣 李红丽 杨卫兵 秦茂林
• 来源期刊: 西南国防医药
• 学科: 医学
• 关键词: 胚胎成纤维细胞 人胚胎生殖嵴细胞 滋养层 60Coγ射线 小鼠
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 815-818
• 分类号: R329.1
• 字数: 3515字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-0188.2010.08.002

摘要

目的 筛选并建立高效胚胎干细胞滋养层体外培养的最佳条件,利于人胚胎生殖嵴原始生殖细胞(PGC)的增殖.方法 分离培养孕14.5 d(E14.5 d)和新生0 d(P0)昆明小鼠原代胚胎成纤维细胞(MEF)并传代制备滋养层,以60Co γ射线照射后继续培养并接种人PGC.采用活细胞拒染法、免疫细胞化学染色,对比观察滋养层的生长活性和照射后分泌功能;采用碱性磷酸酶(AKP)染色技术鉴定人PGCs的生长状态.结果 (1)E14.5 d和P0来源的第3～5代MEF生长旺盛.P0来源第6代与E14.5 d来源同代MEF相比深染变形细胞增达32%,经60Co γ照射后衰老细胞明显增多(P＜0.05).(2)E14.5 d来源第3～6代和P0来源第3～4代MEF经60Co γ照射后培养5 d时,Ⅰ型胶原蛋白免疫阳性细胞数目较多,染色较深;但P0来源第5代其阳性细胞数目明显减少,染色变浅.(3)人PGCs接种于E14.5 d第3代制备的滋养层3～4 d后见典型的ESC小克隆团,细胞呈圆形;AKP染色呈深蓝色团;而接种于P0来源第6代MEF制备的滋养层5～6 d,可见ESC克隆松散、变大,周围边界不清,细胞紊乱.结论 以60Co γ射线照射小鼠E14.5 d来源第3～6代MEF是制备滋养层的最佳来源,可维持人PGCs增殖.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	秦茂林	第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室	28	156	8.0	12.0
2	李红丽	第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室	45	138	8.0	10.0
3	李欣	解放军181医院皮肤科	6	8	2.0	2.0
4	杨卫兵	解放军181医院皮肤科	4	3	1.0	1.0
5	刘尧	第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室	2	0	0.0	0.0
6	李丽君	解放军181医院皮肤科	3	4	1.0	2.0