小鼠β-防御素6与甲型流感病毒M2e基因融合表达及其免疫特性研究

• 作者: 冯伟 刘冯欢 巩天祥 张强 李婉宜 李明远 王保宁 罗俊 蒋忠华 邝玉
• 来源期刊: 西部医学
• 学科: 医学
• 关键词: β-防御素 6 甲型流感病毒 mBD6-M2e融合基因 淋巴细胞增殖实验
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学与实验研究
• 页码范围: 400-402,405
• 页数: 4页
• 分类号: R446.9|R373.1+3
• 字数: 2728字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3511.2010.03.003

摘要

目的 构建小鼠β-防御素6(mBD6)与甲型流感病毒M2蛋白胞外功能区(M2e)真核表达质粒,并研究其在真核细胞中的表达与免疫特性.方法 通过重叠延伸PCR法(overlap-PCR)将M2e与mBD6通过一段多肽接头Gly4Ser融合成为mBD6-M2e.将其插入戢体pcDNA3.1(+),构建成pcDNA3.1(+)/mBD6-M2e.鉴定正确后,转染MDCK细胞,免疫荧光、MTT检测mBD6-M2e表达和分泌.免疫小鼠,半定量PCR检测脾细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α、CCR7表达.结果 融合基因mBD6-M2e真核表达栽体pcDNA3.1(+)/mBD6-M2e构建成功,在MDCK细胞膜上成功表达融和蛋白,转染细胞的培养上清刺激淋巴细胞增殖.免疫小鼠细胞因子表达改变.结论 融合基因mBD6-M2e真核表达栽体成功构建,为研究防御素在流感病毒核酸疫苗中的佐剂作用奠定了基础.