小鼠β防御素2、3融合基因载体构建及其抗流感病毒作用

• 作者: 丰锋 冯艳 刘冯欢 巩天祥 张强 李婉宜 李明远 王保宁 邝玉
• 来源期刊: 西部医学
• 学科: 医学
• 关键词: β防御素 甲型流感病毒 融合基因 重叠延伸PCR 免疫荧光
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学与实验研究
• 页码范围: 396-399
• 页数: 4页
• 分类号: R474.1+3
• 字数: 3543字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3511.2010.03.002

摘要

目的 构建mBD2与mBD3融合基因的真核表达栽体,检测其在MDCK细胞中的表达情况,并探讨其抗病毒特性.方法 利用PCR方法分别扩增mBD2与mBD3基因片段,通过重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)将mBD2与mBD3通过一段多肽接头Gly4Ser连接为融合基因mBD2与mBD3.将该融合基因插入真核表达栽体pcDNA3.1(+)获得重组质粒pcDNA3.1(+)/mBD2-mBD3,经酶切、PCR及测序鉴定正确后.用脂质体转染MDCK细胞,通过免疫荧光检测融合蛋白表达情况,最后采用CCID50测定并分析抗流感病毒作用.结果 经鉴定后证实,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)/mBD2-mBD3正确,该重组质粒能在MDCK细胞中稳定表达,CCID50实验结果说明有较好的抗流感活性.结论 本研究成功构建mBD2-mBD3融合基因的真核表达质粒,并证实其融合蛋白能在MDCK细胞中稳定表达,该结果为进一步研究防御素抗病毒机制奠定了坚实的基础.