应用Cyclin D1和bcl-2靶标的siRNA慢病毒载体构建和鉴定

• 作者: 吴小三 孙佼 张春林 曾炳芳 赵曜 高田田
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨肉瘤 bcl-2基因 cyclin D1基因 RNA干扰 慢病毒 组织工程
• 年，卷（期）: 2010,（20）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 3709-3713
• 分类号: R318
• 字数: 5026字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.20.023

摘要

背景:近年来,与骨肉瘤耐药相关的基因研究大多局限于单个基因或单个通路.而进行细胞凋亡和细胞周期调控双通道同时阻断有可能逆转药物耐受机制.目的:构建bcl-2和cyclin D1特异性siRNA慢病毒载体,拟将其转入骨肉瘤耐药细胞株,探讨对骨肉瘤耐药性的逆转作用.方法:采用限制性内切酶酶切、T4DNA连接酶连接等方法,将bcl-2和cyclin D1基因分别插入慢病毒载体pSIH1-H1-copGFP shRNA Vector中,构建bcl-2和cyclin D1与pSIH1-H1-copGFP共表达的慢病毒载体(pSIH1-H1-copGFP-bcl-2-siRNA和pSIH1-H1-copGFP-cyclinD1-siRNA).构建成功后的慢病毒质粒系统和pPACK包装质粒共转染293T细胞,过滤,浓缩病毒,利用荧光蛋白作为报告基因,对病毒滴度和感染效率进行检测.结果与结论:4对bcl-2和cyclin D1特异性siRNA与双酶切慢病毒载体pSIH1-H1-copGFP shRNA Vector连接成功.共转染293T细胞包装病毒并浓缩后滴度达1.14×104 jfu/μL,适合感染目的细胞.实时荧光定量PCR检测结果显示对bcl-2和cyclinD1基因的干扰效率最高分别达88%和87%.证实将siRNA技术应用于bcl-2和cyclin D1,能够构建出有效的bck2和cyclin D1特异性siRNA慢病毒载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曾炳芳	上海交通大学附属第六人民医院骨科	428	5651	33.0	53.0
2	张春林	上海交通大学附属第六人民医院骨科	59	293	9.0	14.0
3	吴小三	上海交通大学附属第六人民医院骨科	1	3	1.0	1.0
4	赵曜	上海交通大学附属第六人民医院骨科	5	7	2.0	2.0
5	高田田	上海市第八人民医院骨科	13	59	4.0	7.0
6	孙佼	上海交通大学附属第六人民医院骨科	4	8	2.0	2.0