昆明小鼠胚胎干细胞滋养层制备条件的实验研究

• 作者: 莫曾南 覃敏 黄林
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 胚胎成纤维细胞 胚胎干细胞 滋养层
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 62-65
• 分类号: Q95-3|Q75|Q813
• 语种: 中文

摘要

目的:建立小鼠胚胎成纤维细胞(MEFS)滋养层,用于昆明小鼠胚胎干细胞的培养.方法:取妊娠13.5的胎鼠,采用组织消化法分离培养出原代成纤维细胞,对MEFS的生长形态、生长曲线及分裂指数进行观察;MTT法筛选丝裂霉素C(MMC)作用的最佳浓度和时间;取妊娠3.5 d的囊胚在经MMC处理的饲养层上培养,观察胚胎干细胞集落生成情况.结果:MEFS为一种贴壁生长且增殖速度较快的细胞,第三代细胞增殖旺盛,第5代以后细胞开始变形并趋于衰老;MMC能抑制胚胎成纤维细胞的增殖,最佳的作用浓度和时间是10ug/ml作用2.5～4h,20ug/ml作用1-2.5h.妊娠3.5d小鼠囊胚在饲养层上培养能形成典型的"鸟巢"状干细胞集落,并可维持胚胎干细胞的正常形态且不发生分化.结论:这种方法制备的滋养细胞层适用于胚胎干细胞的培养.