快速微量提取番茄DNA及SSR-PCR反应体系的优化

• 来源期刊: 北方园艺
• 学科: 农学
• 关键词: 番茄 DNA微量提取 PCR反应体系优化 分子标记
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 113-115
• 分类号: S641.203.6
• 字数: 1457字
• 语种: 中文

摘要

以番茄叶片为试材,采用改进的CTAB法,电钻研磨,提取过程中加入醋酸铜,设计4因素3水平的正交试验对PCR反应体系进行优化,同时利用梯度PCR对退火温度进行选择选择.结果表明:优化的10μL反应体系含:1 × buffer,1.2 mmol/L Mg2+,1.5 mmol/L dNTPs,1.2 μmol/L引物,0.75 U Taq DNA聚合酶,10 ng模板DNA.扩增程序为:94℃预变性2 min;94℃变性30 s,49.2℃退火30 s,68℃延伸30 s,共35个循环;最后72℃延伸8 min.优化的反应体系可以用于SSR分子标记机的研究,在所有SSR引物中基本都能有效扩增;改进的CTAB法提取的DNA纯度更高.