S100A8启动子的克隆及转录活性检测

• 作者: 刘爱华 卢康荣 姜勇 王娟 罗海华 邓鹏 钟明明 钟钦松
• 来源期刊: 广东医学
• 学科: 医学
• 关键词: S100A8 启动子 基因 报告
• 年，卷（期）: 2010,（17）
• 页码范围: 2229-2232
• 分类号: R4
• 字数: 3798字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-9448.2010.17.021

摘要

目的 构建小鼠S100A8基因启动子序列的报告基因载体,通过报告基因技术检测在静息、脂多糖(LPS)、PolyI:C及NaASO2等刺激下该段启动子的转录活性.方法 采用PCR从小鼠脾组织基因组DNA扩增S100A8启动子序列(-826～+468);将其克隆至pDsRed1-1载体上,重组质粒经过PCR、酶切及测序分析正确无误后转染小鼠巨噬细胞系RAW264.7,荧光显微镜下观察静息、LPS、PolyI:C和NaASO2刺激下红色荧光蛋白表达.结果 正确扩增出小鼠S100A8启动子片段(-826～+468);成功构建其红色荧光蛋白报告基因载体,证实该质粒转染RAW 264.7细胞后静息状态下仅可见少量而微弱的红色荧光,经LPS、PolyI:C和NaASO2刺激后,红色荧光强度和亮度明显增加.结论 小鼠S100A8启动子(-826～+468)在静息状态下即具有转录活性,炎性、氧化应激刺激后S100A8表达增强;该启动子的成功克隆和其报告基因载体的构建,为进一步研究S100A8的基因表达调控机制打下了良好的基础.