Wnt3a转染小鼠胸腺激酶缺陷细胞及对β-连环素蛋白亚细胞分布的影响

• 作者: 刘正山 尚延昌 张成 李勇 熊符 王淑辉 许勇峰
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: Wnt3a 胸腺激酶缺陷细胞 β-连环素蛋白
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 302-305
• 页数: 4页
• 分类号: R318
• 字数: 4123字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.02.026

摘要

背景:Wnt信号通路是动物胚胎发育过程中重要的调控通路,建立Wnt信号通路细胞模型对于研究该通路有重要意义.目的:以Wnt3a真核表达质粒转染小鼠胸腺激酶缺陷细胞,构建能够持续激活Wnt信号通路的体外细胞模型,观察经典Wnt信号通路对β-1连环素蛋白亚细胞分布的影响.方法:将扩增真核表达质粒pgk-Wnt3a-pcDNA3.0进行酶切鉴定.应用脂质体转染技术将真核表达质粒pgk-Wnt3a-pcDNA3.0和对照质粒pgk-neo-pcDNA3.0转染入胸腺激酶缺陷细胞,经过G418筛选后挑出细胞克隆,扩大培养.应用RT-PCR技术检测表达产物,应用间接免疫荧光技术检测Wnt3a对鼠胸腺激酶缺陷细胞β-catenin亚细胞分布的影响.结果与结论:Wnt3a质粒经过酶切鉴定证明所扩增的质粒为目的质粒.经过G418筛选3周后,挑选10个稳定转染的细胞克隆,进行RT-PCR检测,可见在L-Wnt3a细胞的cDNA产生1条长度为320 bp亮带,表明扩增产物为所需要的目的片段,Wnt3a质粒转染胸腺激酶缺陷细胞后有Wnt3a在mRNA转录水平表达.转染对照质粒的胸腺激酶缺陷细胞cDNA未扩增出目的条带.免疫荧光检测可见Wnt3a质粒转染胸腺激酶缺陷细胞后细胞浆中有Wnt3a蛋白表达,转染对照质粒组无表达.Wnt3a质粒转染胸腺激酶缺陷细胞核中可见明亮的红色荧光,提示β-连环素蛋白在胸腺激酶缺陷细胞-Wnt3a细胞聚集并进入细胞核中.转染对照质粒的胸腺激酶缺陷细胞浆未见有明显β-连环素蛋白着色,细胞核中无β-连环素蛋白的聚集.构建了能够持续激活Wnt信号通路的体外细胞模型,真核表达Wnt3a质粒转染胸腺激酶缺陷细胞能够获得稳定表达,促进胸腺激酶缺陷细胞浆中β-连环素蛋白向细胞核转移.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李勇	中山大学附属第一医院神经科	74	1071	12.0	31.0
2	张成	中山大学附属第一医院神经科	219	968	12.0	19.0
3	刘正山	中山大学附属第一医院神经科	4	18	1.0	4.0
4	熊符	中山大学附属第一医院神经科	11	37	4.0	5.0
5	尚延昌	解放军总医院南楼神经科	23	154	6.0	12.0
9	王淑辉	首都医科大学附属北京友谊医院神经科	29	136	7.0	10.0