重叠延伸PCR法构建小鼠IL-35单链融合基因及其真核表达载体

• 作者: 周艳春 牛青霞 许燕璇 陈少英
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 小鼠白介素35 融合基因 重叠延伸PCR
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 1440-1442
• 分类号: Q95-3|Q75|R392.11
• 语种: 中文

摘要

目的:构建小鼠IL-35单链融合基因及其真核表达载体.方法:将10 ug LPS和等体积的完全福氏佐剂乳化后皮下注射C57BL/6小鼠,7天后,取小鼠脾脏,提取脾细胞总RNA,通过RT-PCR克隆小鼠EBI3和IL-12p35 cDNA;采用重叠延伸PCR,通过编码疏水性多肽接头(Gly4Ser)3的DNA序列连接小鼠EBI3全长基因和IL-12p35成熟肽基因,构建小鼠IL-35单链融合基因(Inouse sigle chain IL-35,mscIL-35),并将其克隆至pcDNA3.1/V5-His TOPO TA载体.通过酶切和测序鉴定阳性重组载体.结果:DNA序列分析结果表明:小鼠IL-35单链融合基因中EBI3、IL-12p35和linker的连接顺序、方向及序列完全正确.结论:成功构建了小鼠IL-35单链融合基因及其真核表达载体,为进一步探讨IL-35的生物学功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	牛青霞	汕头大学医学院炎症与免疫性疾病研究所	17	107	4.0	10.0
2	许燕璇	汕头大学医学院炎症与免疫性疾病研究所	9	20	3.0	3.0
3	周艳春	汕头大学医学院炎症与免疫性疾病研究所	17	194	4.0	13.0
4	陈少英	汕头大学医学院炎症与免疫性疾病研究所	5	8	2.0	2.0