玉米谷氨酰胺转胺酶基因的克隆及原核表达

• 作者: 张兰威 王利 秦兰霞
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 玉米嫩叶 大肠杆菌 谷氨酰胺转胺酶 表达 酶活
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 177-181
• 页数: 5页
• 分类号: Q785|Q786
• 字数: 4626字
• 语种: 中文

摘要

从玉米嫩叶中提取总RNA,通过RT-PCR的方法扩增出玉米谷氨酰胺转胺酶(TGase)全长基因,回收目的片段并测序,该基冈编码区全长1605bp,编码535个氨基酸残基,分子量为60.9kD,与GenBank(登录号:AJ421525)上已发表的序列同源性为100%.按正确的阅读框架将玉米TGase基因片段定向克隆到表达载体pET-28a上,将重组质粒转化剑大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株,1mmol/L IPTG诱导融合蛋白表达,经凝胶分析软件测得蛋白表达量约占总蛋白的15%,以His-Tag抗体作为一抗,采用Western-blot方法检测目的蛋白,结果证明所表达的特异蛋白是带有His-Tag的重组融合蛋白,利用Ni~(2+)-NTA琼脂糖树脂亲和层析柱纯化日的蛋白,SDS-PAGE鉴定为单一条带,测得纯化后的TGase酶活力达到16U/mg.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张兰威	哈尔滨工业大学食品科学与工程学院	196	1765	22.0	28.0
2	秦兰霞	东北农业大学黑龙江省乳品工业技术开发中心	7	25	2.0	5.0
3	王利		1	2	1.0	1.0