重组花生过敏原Ara h2的生物合成

• 作者: 朱盼 罗春萍 胡纯秋 陈红兵 高金燕
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 食物过敏 花生过敏原Ara h2 生物合成
• 年，卷（期）: 2010,（15）
• 页码范围: 203-207
• 分类号: Q786
• 字数: 3858字
• 语种: 中文

摘要

为获得重组花生过敏原Ara h 2.通过RT-PCR合成cDNA,并以此为模板进行PCR扩增目的基因Ara h 2,扩增产物经纯化后克隆至pMD19-T Simple载体中,构建重组质粒pMD19-T-Ara h 2.上述重组质粒经酶切纯化后定向克隆到pGEX-4T-1表达载体中,构建原核表达载体pGEX-4T-1-Ara h 2,并转化表达宿主菌BL21-codonPlus(DE3)-RIPL中,经IPTG诱导表达.SDS-PAGE电泳结果表明,该表达蛋白大小约为46kD,与理论值相符.通过Glutathione Sepharose 4B凝胶亲和层析方法纯化融合蛋白GST-Ara h 2,获得融合蛋白纯度约为90%.Western blotting分析表明,经纯化的融合蛋白能与抗Ara h 2兔血清发生特异性反应,说明该蛋白具有良好的免疫原性.