改良胶原酶经腹主动脉灌注消化法分离大鼠肝细胞

• 作者: 余松林 吴旭波 吴薇 张瑞 彭承宏 李宏为 杜志勇 沈柏用 王加祥 韩宝三 黄芳
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 肝细胞分离 大鼠 原代培养 胶原酶 腹主动脉灌注
• 年，卷（期）: 2010,（44）
• 页码范围: 8253-8256
• 分类号: R318
• 字数: 4766字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.44.021

摘要

背景:良好的分离技术是获取高活性肝细胞的前提.目前,国内外普遍采用的是经门静脉的两步胶原酶灌注法.但该方法仍存存胶原酶用量大、操作繁琐、流程长、对设备要求较高等问题.目的:寻找一种简单有效的人鼠肝细胞分离培养方法.方法:取SD大鼠10只,按改良经腹主动脉灌注法分离培养大鼠肝细胞,重复10次分离肝细胞实验,观察各项指标结果并与已发表文献进行对比分析.以SD大鼠作肝细胞供体,采用Ⅳ型胶原酶经腹丰动脉灌注,供体肝脏肝门部结构,肝上及肝下腔静脉封闭保留胶原酶消化分离获取肝细胞,经200目和300目筛滤过,滤过后的悬液转移至离心管中分别以1 000,500,300 r/min离心各3 min以纯化肝细胞,以锥虫蓝染色法测细胞活性,在倒置显微镜下观察肝细胞纯度及形态变化.结果与结论:胶原酶消化法所扶取的肝细胞纯度高、形态完整、活性高.提示改良胶原酶经腹主动脉灌注消化法是一种较好的肝细胞分离方法.