pIRES2-EGFP-gAd质粒载体构建及在大鼠肾脏的表达

• 作者: 刘伏友 刘映红 田俊玮 袁芳 陈俊香
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 脂联素 pIRES2-EGFP载体 阳离子脂质体 基因转染 肾脏
• 年，卷（期）: 2010,（33）
• 页码范围: 6125-6128
• 分类号: R318
• 字数: 4301字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.33.011

摘要

背景:已有研究证实经腹腔注射基因转染肾脏是一种简便有效的实验方法.目的:构建表达球形脂联素(gAd)的pIRES2-EGFP-gAd质粒,观察其在大鼠肾脏的表达.方法:以pET/gAd质粒为模板,PCR扩增目的片段,转化大肠杆菌,用EcoR Ⅰ BamH Ⅰ双酶切后,与pIRES2-EGFP荧光质粒连接,重组构建pIRES2-EGFP-gAd质粒.将构建成功的pIRES2-EGFP-gAd质粒采用脂质体介导经腹腔注射正常大鼠体内,于注射24,48,96 h和7 d留取肾脏标本进行冰冻切片,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白在肾组织中的表达,同时采用Western bot检测肾组织绿色荧光蛋白的表达.结果与结论:重组构建的pIRES2-EGFP-gAd载体经双酶切电泳分析及DNA测序证实无碱基突变.在腹腔注射脂质体/pIRES2-EGFP-gAd转染复合物24 h,即可在肾小球肾间质检测到绿色荧光,注射48 h,荧光进一步增强,之后逐渐减弱,至注射7 d时,荧光强度明显减弱.Western bot检测的绿色荧光蛋白的表达结果与冰冻组织切片结果一致.说明脂质体能够介导pIRES2-EGFP-gAd真核载体在大鼠肾脏表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘伏友	中南大学湘雅二院肾内科	193	1123	16.0	21.0
2	袁芳	中南大学湘雅二院肾内科	52	285	10.0	15.0
3	刘映红	中南大学湘雅二院肾内科	67	329	11.0	15.0
4	陈俊香	中南大学湘雅二院肾内科	25	96	5.0	9.0
5	田俊玮	中南大学湘雅二院肾内科	5	19	2.0	4.0