锌指转录因子snai1高表达质粒构建和稳定株的筛选

• 作者: 周传文 李倩君
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 锌指转录因子snai1 表达质粒 感受态细胞 结肠癌 转染
• 年，卷（期）: 2010,（41）
• 页码范围: 7687-7690
• 分类号: R318
• 字数: 3289字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.41.021

摘要

背景:研究表明Snai1和E-钙黏素在肿瘤组织中有负向表达关系,且与Snai1与CDH1启动子区box盒结合,抑制CDH1基因转录.目的:构建针对snai1的高表达载体,建立稳定转染的细胞株.方法:根据GenBank中snai1的基因序列人工合成snai1全序列,将合成好的序列装入Pmd-18T载体并转化感受态细胞DH5α,进行阳性克隆筛选.测序验证重组克隆中基因序列正确后,用EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切Pmd-18T/snai1质粒,将所得的snai1全基因片段转入pcDNA3.1(+)空质粒,构建pcDNA(+)/snai1真核表达质粒,同时构建阴性对照质粒,并分别对结肠腺癌细胞HT-29进行转染,最后利用G418进行稳定表达株的筛选,并采用RT-PCR和Western bl0t鉴定宿主细胞内snai1基因的表达情况.结果与结论:成功构建了真核表达质粒pcDNA(+),snai1,顺利转染结肠癌细胞HT-29后于600 mg/L G418浓度时筛选21 d得到snai1基因稳定表达株,构建的snai1基因正义表达质粒pCDNA3.1(+)/snai1转染宿主细胞后可促进snai1基因的表达.