正常人成骨细胞系的建立及鉴定

• 作者: 张学敏 时述山 李亚非 马文辉
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 成骨细胞 培养 生物学特征 人 骨组织工程
• 年，卷（期）: 2010,（15）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 2661-2666
• 分类号: R318
• 字数: 6568字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.15.001

摘要

背景:骨细胞的体内研究由于受许多因素的影响而不便于结果分析.分离的骨细胞培养则可获得单一的细胞系,以此来观察各种不同物质或实验手段对细胞的直接效应,可以避免许多干扰因素的影响.目的:探讨建立可行的、能大量生产人正常成骨细胞培养方法和保存方式.方法:取引产胎儿四肢皮质骨,彻底刮除皮质骨表面的骨膜及内部的骨髓,并反复冲洗去除残余组织,胰酶、胶原酶消化后,将骨粒平铺于尼龙网上培养,建立正常人成骨细胞系.观察细胞形态及组织学变化;以免疫组织化学方法测定其生成Ⅰ型胶原情况.利用液氮冻存细胞以建立适当的保存方法.选取对数生长良好的细胞进行遗传学特性一染色体的制备.结果与结论:成骨细胞呈梭形,多突起;细胞核呈卵圆形,偏于一侧;胞体大,胞浆丰富;碱性磷酸酶染色可见胞浆中含有大量的灰黑色颗粒,某些部位染成黑色,定量分析细胞内的碱性磷酸酶、骨钙素水平明显高于成纤维细胞;细胞免疫组织化学染色表明其主要合成Ⅰ型胶原.染色体分析表明,其具有23对染色体,未发现异常染色体,从而证实了其为正常人体来源的细胞,经培养与多次传代后仍保持正常,未发生变异.通过使用对新生骨有特异性的荧光染料四环素进行染色标记,证实了此培养细胞具有成骨能力.证实建立了可靠的正常人成骨细胞系,并能采用液氮冷冻的方式长期保存.经多次传代其遗传性质及生物学特征均未发生变异,复苏后的冻存细胞仍具有稳定的生物学特性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李亚非	解放军北京军区总医院骨科	4	8	2.0	2.0
2	马文辉	解放军白求恩国际和平医院骨科	6	19	3.0	4.0
3	时述山	解放军北京军区总医院骨科	7	17	3.0	3.0
4	张学敏		3	19	2.0	3.0