大鼠肌源性干细胞的分离、纯化和培养

• 作者: 叶锦 李黔生 梁培禾 王鹏 聂志林 陈锦 靳风烁
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 酶 消化 密度梯度离心 差速贴壁 免疫细胞化学染色 分离培养 纯化 肌源性干细胞
• 年，卷（期）: 2010,（14）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 2596-2600
• 分类号: R394.2
• 字数: 4654字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.14.026

摘要

背景:要获得满足临床需要的肌源性干细胞,体外筛选和扩增已成为关键环节.目的:拟建立稳定高效的成年大鼠肌源性干细胞的分离培养、纯化方法.方法:成年SD大鼠麻醉后,无菌条件下取骨骼肌,采用Ⅺ型胶原酶、Dispase和胰酶消化法获得肌源性干细胞,以密度梯度离心法和差速贴壁法进行纯化.记录细胞生长曲线,MTT比色法观察不同接种密度对细胞生长的影响,采用免疫细胞化学染色对细胞进行鉴定.结果与结论:原代肌源性干细胞体积较小,贴壁缓慢,折光性较好,多呈球形、梭形或纺锤形,增殖缓慢.传代培养后,加入含体积分数为20%血清浓度的完全培养基,以1×109L-1密度接种时活细胞数量最多,为适宜接种密度,传1～4代细胞生长状态良好.免疫细胞化学染色结果为desmin(+),CD34(+),CD45(-),Sea-1(+),证实通过体外原代培养获得了高纯度的肌源性干细胞,并成功扩增.