重组降血压肽VLPVPR酶解制备工艺优化及降解原因分析

• 作者: 刘冬 周丽珍 孙海燕 李艳 肖平
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 降血压肽 制备 酶解 降解 生物材料与生物技术
• 年，卷（期）: 2010,（25）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 4627-4630
• 分类号: R318
• 字数: 4127字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.25.017

摘要

背景:采用基因工程技术与酶解法制备重组降血压肽VLPVPR,酶解产物为多肽混合物,易受微生物侵染而发生降解.目的:分析胰蛋白酶酶解制备重组降血压肽VLPVPR过程中影响VLPVPR稳定性的因素,并对酶解工艺进行了优化.方法:采用反相高效液相色谱法检测酶解产物中降血压肽VLPVPR的含量.工程菌表达产物经0.22 μm膜过滤除菌,观察其酶解过程中降血压肽VLPVPR含量随时间的变化情况,与不过滤除菌酶解过程进行比较,探讨杂菌污染和工程菌自身蛋白水解酶对VLPVPR降解的影响.采用正交试验对温度、pH、酶浓度和时间等酶解工艺参数进行优化.结果与结论:降血压肽VLPVPR标准品与胰蛋白酶作用4 h,含量基本不发生变化,差异无显著性意义(P＞0.05),说明胰蛋白酶不能再进一步降解VLPVPR.经过过滤除菌后的细胞破碎上清液在酶解过程中的VLPVPR含量在达到最大后迅速降低,未经过滤除菌的样品中的降血压肽比过滤除菌的样品降解得更快,差异有显著性意义(P＜0.05),表明工程菌释放的胞内酶和杂菌污染是导致VLPVPR降解的主要原因.通过正交试验优化了酶解制备重组降血压肽VLPVPR的最佳条件:温度30℃,pH9.5,胰蛋白酶终浓度180 U/mL,酶解时间1 h.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘冬		85	1024	17.0	28.0
2	孙海燕		49	316	10.0	15.0
3	李艳		29	86	6.0	8.0
4	肖平	广西大学轻工与食品工程学院	2	14	2.0	2.0
5	周丽珍		9	46	4.0	6.0