荷斯坦奶牛IFN-γ基因的克隆、序列分析及表达研究

• 作者: 乔军 任艳 倪伟 刘佳旭 张辉 李贞 杨明峰 陈创夫
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 农学
• 关键词: 荷斯坦奶牛 γ-干扰素基因 序列分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医科学
• 页码范围: 12-16
• 页数: 5页
• 分类号: S858.23
• 字数: 3809字
• 语种: 中文

摘要

利用RT-PCR技术从荷斯坦奶牛外周血淋巴细胞总RNA中扩增IFN-γ(ccIFN-γ)基因,克隆至pMD18-T载体进行测序.测序结果表明,ccIFN-γ基因全长501 bp,编码166个氨基酸,其中前23个氨基酸残基构成信号肽序列,后面147氨基酸残基构成成熟肽,其中合有2个潜在的N-链糖基化位点.二级和三级结构预测发现,ccIFN-γ蛋白分子中存在7个的α-螺旋,中间由无规卷曲连接,折叠成由α-螺旋包绕的中空状结构.将ccIFN-γ成熟肽编码区序列进一步克隆至pET-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达.经SDS-PAGE分析,表达出与预期大小(20.6 KDa)相符的重组蛋白,占菌体蛋白18.6%.Western blot检测证实表达的融合蛋白为牛IFN-γ,这为进一步开展重组ccIFN-γ生物学活性的研究奠定了基础.