转化生长因子β1基因转染鼠脂肪间充质干细胞的可行性

• 作者: 李宝军 缪时金 罗为民 许宇霞 谢杰 邓展生
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 基因重组 载体 质粒 脂肪间充质干细胞 转化生长因子β1
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 63-69
• 页数: 7页
• 分类号: R394.2
• 字数: 8261字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.01.014

摘要

背景:脂肪间充质干细胞在转化生长因子β_1等生长因子的调控下可被诱导分化为软骨细胞.然而,外源性转化生长因子β_1存在引起趋化性、激发炎症反应、造成局部损伤、有效成分容易被稀释或丢失、半衰期短、缺少理想的转运蛋白等缺陷.因此,利用基因重组技术,使种子细胞表达转化生长因子β_1,对软骨组织工程的进一步发展具有重要的指导意义.目的:探讨真核表达载体pcDNA3.1-转化生长因子β_1质粒的构建方法,并观察其转染脂肪间充质干细胞的可行性.方法:利用基因重组技术,将大鼠转化生长因子β_1全长基因的PCR产物与克隆载体pT7Blue连接,并用大肠杆菌筛选阳性重组体构建真核表达质粒,采用XboⅠ、Hind Ⅲ双酶切及测序方法对质粒进行鉴定;将已经纯化的pcDNA3.1-转化生长因子β_1质粒和空载体pcDNA3.1质粒分别采用阳离子脂质体试剂LipofectamineTM2000转染脂肪间充质干细胞,经G418抗性筛选后扩大培养,同时用pcDNA3.1-绿色荧光蛋白观察转染效率.结果与结论:重组质粒经XboⅠ、Hind Ⅲ双酶切后出现1.35 bp和5.4 kb 2条带,测序结果显示重组质粒所包含的转化生长因子β_1全长碱基序列完全正确,绿色荧光蛋白显示其转染脂肪干细胞的转染效率> 80%,且转染细胞后有转化生长因子β_1 mRNA和蛋白的表达上调.提示利用基因重组技术可成功构建能转染脂肪间充质干细胞的真核表达载体pcDNA3.1-转化生长因子β_1质粒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邓展生	中南大学湘雅医院脊柱外科	150	1019	15.0	23.0
2	李宝军	中南大学湘雅医院脊柱外科	21	117	7.0	10.0
3	许宇霞	长沙市中心医院脊柱外科	10	18	2.0	4.0
4	罗为民	长沙市中心医院脊柱外科	11	29	3.0	5.0
5	谢杰	长沙市中心医院脊柱外科	2	5	2.0	2.0
6	缪时金	长沙市中心医院脊柱外科	2	2	1.0	1.0