人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2双基因共表达腺病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 刘思景 王斌 王辉 肖启贤 郭伟韬 陈子秋 黄云
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 人骨形态发生蛋白2 人成纤维细胞生长因子2 腺病毒载体 内部核糖体进入位点序列 转染 基因治疗
• 年，卷（期）: 2010,（24）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 4402-4406
• 分类号: R318
• 字数: 4443字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.24.008

摘要

背景:内部核糖体进入位点序列载体能将上下游基因共同转录,故通过此载体可使连接在一起的人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2同时高表达,可为骨缺损的治疗提供新方法.目的:实验通过引入内部核糖体进入位点序列,采用基于attLXattR的λ噬茵体位点特异性重组系统的GatewayTM技术构建带有人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2双基因重组腺病毒载体并进行鉴定.方法:用聚合酶链反应方法扩增人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2目的基因,将两个基因亚克隆至pIRES2-EGFP载体中,构建phBMP2-IRES-hFGF2载体,通过BP反应将hBMP2-IRES-hFGF2重组到载体pDONR221中,再通过LR反应将其转移到腺病毒载体pAd/CMV/V5-DEST中,线性化后转染293细胞进行包装获得重组腺病毒Ad-hBMP2-IRES-hFGF2.结果与结论:phBMP2-IRES-hFGF2经酶切及测序鉴定正确,带hBMP2-IRES-hFGF2的载体在293细胞中包装成功,获得成熟的病毒颗粒,病毒滴度为2.82×1010 ifu/mL,证实成功构建了带有人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2双基因重组腺病毒载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭伟韬	广东医学院附属医院骨科	49	244	9.0	14.0
2	王斌	广东医学院附属医院骨科	24	143	7.0	11.0
3	肖启贤	广东医学院附属医院骨科	9	33	4.0	5.0
4	黄云	广东医学院附属医院骨科	6	26	3.0	5.0
5	王辉	广东医学院附属医院骨科	7	46	4.0	6.0
6	刘思景	广东医学院附属医院骨科	11	57	5.0	7.0
7	陈子秋	广东医学院附属医院骨科	7	24	4.0	4.0