人白细胞介素12腺病毒载体构建及在人骨髓间充质干细胞中的表达

• 作者: 谭晓华 陈媛媛 马晶莹
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素12 骨髓间充质干细胞 腺病毒载体 基因治疗 干细胞
• 年，卷（期）: 2010,（23）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 4186-4190
• 分类号: R394.2
• 字数: 5647字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.23.002

摘要

背景:研究表明,白细胞介素12是一种强有力的抗肿瘤细胞因子,骨髓间充质干细胞易于外源基因的导入和表达,且具有较弱的免疫抗原性和免疫调节功能,因此,利用携带白细胞介素12基因的间充质干细胞对于肿瘤的治疗具有极大的发展前景.目的:构建人白细胞介素12 5型腺病毒载体(Ad hIL-12),感染人骨髓间充质干细胞,检测白细胞介素12的表达.方法:提取成熟的树突状细胞的总RNA,用RT-PCR方法获得hIL-12 p35和p40基因cDNA,p35和p40 cDNA通过脑心肌炎病毒内部核酸进入位点连接,构建pDC515 hIL-12 p35/IRES/p40腺病毒穿梭质粒.采用Ad MaxTM腺病毒载体体系,pDC515 hIL-12 p35/IRES/p40穿梭质粒与pBHGfrt△E1,3FLP骨架质粒共转染至293细胞,通过重组酶位点特异性重组获得Ad hIL-12.Ad hIL-12感染人骨髓间充质干细胞后经γ射线照射使细胞失去增殖能力,用hIL-12p70 ELISA试剂盒检测细胞上清中白细胞介素12的水平.结果与结论:经测序证实,RT-PCR所获得的hIL-12 p35和p40基因cDNA序列与GenBank NM_000882(762 bp)和NM_002187(987 bp)提供的序列完全一致.用Ad MaxTM腺病毒载体体系可高效、快捷地获得所要包装的腺病毒载体,通过IRES连接hIL-12的两个亚基p40和p35可有效地表达IL-12p70蛋白;Ad hIL-12腺病毒载体感染人骨髓间充质干细胞后可持续高水平分泌白细胞介素12,在以人骨髓间充质干细胞为载体细胞的基因治疗中有潜在的应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭晓华	解放军北京军区总医院生物治疗中心	6	16	3.0	3.0
2	陈媛媛	解放军北京军区总医院生物治疗中心	1	4	1.0	1.0
6	马晶莹	解放军北京军区总医院生物治疗中心	1	4	1.0	1.0