利用绿色荧光蛋白建立包涵体变-复性新方法

• 作者: 冯延叶 张颋 杨忠 沈亚领 王小宁 王菊芳 金维荣
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 大肠杆菌 包涵体 变性 复性 绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 141-146
• 页数: 6页
• 分类号: Q816
• 字数: 4962字
• 语种: 中文

摘要

为提高常规稀释复性方法的复性效率,以重组绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)包涵体为模型,开发一种新的双变性-稀释复性方法.新方法选取含有精氨酸的碱性复合溶液作为第一变性剂溶解GFP包涵体,通过梯度降低变性液的酸碱度析出溶解目的蛋白,再以尿素为第二变性剂溶解析出的蛋白,随后进行稀释复性.结果显示:与常规方法比,新方法复性的绿色荧光蛋白活性收率提高至1.5～2.3倍,复性蛋白对温度、溶液酸碱度及变性剂的稳定性提高.增强型绿色荧光蛋白(enhanced GFP,EGFP)及其融合蛋白的包涵体采用新方法进行复性,均取得80%以上的活性回收率,说明新方法对GFP系列融合蛋白的包涵体具有一定的适用性.新方法从变性剂使用与包涵体结构的关系出发,突破常规操作中变性剂单次使用的局限,既保留了简便性又提高了常规稀释复性方法的效率.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王菊芳	华南理工大学生物科学与工程学院	88	698	15.0	23.0
2	沈亚领	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	29	312	10.0	17.0
3	冯延叶	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	2	12	2.0	2.0
4	杨忠	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	9	61	4.0	7.0
5	王小宁	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	3	12	2.0	3.0
6	张颋	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	1	3	1.0	1.0
7	金维荣		3	14	2.0	3.0