慢病毒介导可溶性肿瘤坏死因子受体1在小鼠骨髓未成熟树突状细胞中的表达

• 作者: 徐开林 晁亚丽 曾令宇 汤仁仙 潘秀英 王淑华 陈翀 黄一虹
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 可溶性肿瘤坏死因子受体 基因修饰 慢病毒载体 未成熟树突状细胞 免疫耐受
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 941-946
• 页数: 6页
• 分类号: R318
• 字数: 1236字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.05.044

摘要

背景:肿瘤坏死因子α是介导树突状细胞成熟的重要细胞因子之一,可溶性肿瘤坏死因子受体1与其结合可阻断肿瘤坏死因子α的作用,维持树突状细胞于不成熟状态,诱导免疫耐受.目的:构建含有人sTNFR1的慢病毒表达载体,观察其在未成熟树突状细胞中的表达.方法:以人外周血单个核细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增出sTNFR1基因片段,亚克隆至慢病毒转移质粒pXZ208,通过IRES连接eGFP报告基因,建立双顺反子慢病毒转移质粒,命名为pXZ9-sTNFR1,DNA测序鉴定.采用脂质体转染293 FT细胞,根据报告基因eGFP测定病毒滴度.采用小剂量粒-巨噬细胞集落刺激因子+白细胞介素4体外培养扩增C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞.培养第5天,以pXZ9-sTNFRl重组慢病毒上清感染未成熟树突状细胞,RT-PCR检测感染后sTNFRl转录,Westernblot法检测sTNFR1蛋白表达,观察sTNFR1基因修饰及脂多糖刺激后树突状细胞的表型特征.结果与结论:成功构建重组质粒pXZ9-sTNFR1,转染293 FT细胞24 h后观察到eGFP表达,病毒滴度在10~6U/L以上.RT-PCR显示pXZ9-sTNFR1感染的未成熟树突状细胞sTNFR1呈阳性表达,Western blot检测到sTNFR1蛋白存在于感染后未成熟树突状细胞和培养上清中.培养第5天的树突状细胞低表达CD40、CD86、CD80和MHCⅡ类分子,脂多糖刺激后,高表达MHCⅡ类分子和CD40、CD80、CD86分子,显示出成熟型树突状细胞表型特征,sTNFR修饰的树突状细胞MHC Ⅱ类分子和CD40、CD80、CD86分子表达水平无变化.提示:①成功构建了负载sTNFR1基因片段及含eGFP报告基因的慢病毒载体,获得了高滴度的重组慢病毒颗粒.②经慢病毒高效转导的未成熟树突状细胞sTNFR1 mRNA及蛋白稳定地表达,可以保护未成熟树突状细胞不被外源性脂多糖刺激活化,维持树突状细胞于非成熟状态.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄一虹	徐州医学院附属医院血液科	60	261	9.0	12.0
2	潘秀英	徐州医学院附属医院血液科	123	539	10.0	18.0
3	徐开林	徐州医学院附属医院血液科	207	750	11.0	19.0
4	陈翀	徐州医学院附属医院血液科	44	149	5.0	10.0
5	曾令宇	徐州医学院附属医院血液科	81	270	7.0	11.0
6	汤仁仙		74	220	8.0	11.0
7	王淑华	徐州医学院附属医院血液科	2	15	2.0	2.0
8	晁亚丽	徐州医学院附属医院血液科	3	17	2.0	3.0