抗呋喃它酮代谢物的衍生物噬菌体单链抗体库的构建

• 作者: 刘细霞 孙远明 张宏斌 沈玉栋 王弘 罗翠红 黄佳佳
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 抗吠喃它酮代谢物的衍生物 单链抗体 噬菌体展示 序列分析
• 年，卷（期）: 2010,（19）
• 页码范围: 283-287
• 分类号: Q78
• 字数: 3235字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建抗吠喃它酮代谢物(AMOZ)的衍生物噬菌体单链抗体库.方法:从分泌抗AMOZ的单克隆抗体的杂交瘤细胞系(BC3-E8)中提取总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,设计通用简并引物,PCR扩增抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL).经重叠延伸PCR(SOE-PCR),将VH和VL基因用编码(Gly4Ser)3的linker随机拼接成单链抗体(ScFv)基因,然后将其克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,转化大肠杆菌(Escherichia coli)TG1感受态细胞,经辅助噬菌体M13K07超感染,建立噬菌体单链抗体库.随机挑取10个阳性克隆,经PCR和双酶切鉴定,并测序.登陆DNAMAN软件对序列进行分析、比对.结果:成功扩增VH、VL及scFv基因,并得到库容为1.2×106的噬菌体抗体库,噬菌体的滴度为2.0×1010PFU,PCR鉴定及双酶切鉴定文库重组率较高,软件对序列比对结果显示,scFv基因全长序列之间差异为8.38%,Vn序列差异为3.68%,VL序列差异为14.34%,且序列差异多集中在CDR抗原结合区域对应的核酸序列上.结论:已构建抗呋喃它酮代谢物的衍生物噬菌体单链抗体库,为进一步富集筛选并表达抗AMOZ的衍生物的单链抗体提供参考.