人胚胎滋养细胞和胎盘间充质干细胞的分离与纯化

• 作者: 沙文琼 王冬菊 王自能
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 胎盘组织 滋养细胞 胰蚩白酶 DNAse I Percoll 纯度 胎盘间充质干细胞
• 年，卷（期）: 2010,（10）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 1833-1837
• 分类号: R394.2
• 字数: 5392字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.10.026

摘要

背景:胎盘的细胞成分较复杂,其中所包含的滋养细胞在母胎免疫耐受过程中起重要作用,胎盘间充质干细胞具有多向分化潜能以及抑制淋巴细胞增殖的特性,常规分离方法通常难以获得大量且纯度较高的上述两种细胞.目的:拟建立一次操作即可同时获得大量、较高纯度的滋养细胞和胎盘间充质于细胞的操作方案.方法:人胎盘组织洗净剪碎,采用胰蛋白酶和DNAse I共同消化,分3个阶段,每个阶段在恒温37℃下180 r/min消化2 min.重悬消化产物,200目筛网过滤后采用Percoll密度梯度分离液分离,分别收集滋养细胞层和胎盘间充质干细胞层.滋养细胞层以差速贴壁法去除成纤维细胞,胎盘间充质干细胞直接接种于75 cm2培养瓶中培养.观察胎盘组织消化情况,计数滋养细胞数量及其细胞角蛋白7的表达,观察胎盘间充质干细胞生长增殖、表型及成骨分化潜能.结果与结论:经胰蛋白酶和DNAse I消化后,胎盘组织仅剩少许残渣.差速贴壁后,滋养细胞数达(5.48±1.98)×10~8个,细胞角蛋白7阳性率为(90+4.36)%.胎盘间充质干细胞接种19～21 d达90%融合,细胞数为(1.96±0.24)×10~6个,强表达CD29,CD44和HLA-ABC,不表达CD34,CD45,CD14和HLA-DR,诱导后茜素红染色呈鲜艳橙红色,可向成骨细胞方向分化.提示采用胰蛋白酶和DNAse I共同消化胎盘组织,并结合Percoll不连续密度梯度分离液分离细胞,可同时一次性获得大量的滋养细胞和较多的胎盘间充质干细胞,细胞纯度和活性均较好.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王自能	暨南大学附属第一医院妇产科	213	1127	14.0	24.0
2	王冬菊	暨南大学附属第一医院妇产科	10	91	5.0	9.0
3	沙文琼	暨南大学附属第一医院妇产科	11	37	3.0	6.0