人树突状细胞特异性细胞间黏附分子-3-结合非整合素基因RNAi慢病毒载体的构建及外源性筛选与鉴定

• 作者: 李兰 王建军 邬亭亭 郭述良
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒载体 RNA干扰 DC-SIGN基因 树突状细胞 结核病
• 年，卷（期）: 2010,（41）
• 页码范围: 7691-7695
• 分类号: R318
• 字数: 4657字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.41.022

摘要

背景:慢病毒载体是一个能够在原代培养的人树突状细胞中进行RNA干扰的有效工具,但目前国内对RNA干扰技术应用于人树突状细胞特异性细胞间黏附分子-3-结合非整合素分子的研究却少有报道.目的:拟构建人树突状细胞特异性细胞间黏附分子-3-结合非整合素基因RNA干扰慢病毒载体,为调控人树突状细胞特异性细胞间黏附分子-3-结合非整合素表达水平提供有利的工具.方法:根据人树突状细胞特异性细胞问黏附分子3结合非整合素基因的mRNA序列选择4条靶序列,设计合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经Age I和EeoR I双酶切后的pGCSIL-GFP载体连接产生DC-SIGN慢病毒载体,采用PCR及测序鉴定,应用Westem blot技术外源性筛选干扰效率高的有效靶序列.用慢病毒包装系统pGCSIL-GFP、pHelper 1.0和pHelper 2.0共转染包装293T细胞,包装产生慢病毒,以系列稀释法测定病毒滴度.结果与结论:PCR扩增和测序结果显示,人树突状细胞特异性细胞间黏附分子-3-结合非整合素核苷酸链序列插入正确,外源性筛选确定两条干扰效率高的有效靶序列.利用筛选确定的有效靶序列,包装产生慢病毒,其浓缩病毒悬液的滴度为1×109TU/mL.证实实验成功构建了DC-SIGN基因慢病毒载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭述良	重庆医科大学附属第一医院呼吸内科	140	565	14.0	17.0
2	王建军	重庆医科大学附属第一医院呼吸内科	6	9	2.0	3.0
3	邬亭亭	重庆医科大学附属第一医院呼吸内科	13	30	3.0	5.0
4	李兰	重庆医科大学附属第一医院呼吸内科	11	45	3.0	6.0