犬黑皮质素受体3原核表达载体的构建与表达

• 作者: 巴彩凤 王光川 谢建中
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 黑皮质素受体3 犬 pGEX-4T-1 诱导表达 质粒构建
• 年，卷（期）: 2010,（24）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 4421-4424
• 分类号: R318
• 字数: 4139字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.24.012

摘要

背景:近年黑皮质素受体家族在体内能量平衡中的作用越来越受到重视.黑皮质素受体3基因突变是引起体质量增加的重要因素之一,但是目前对黑皮质素受体3的深入研究很少,且未见在蛋白水平上检测其表达的单克隆抗体.目的:构建犬黑皮质素受体3基因编码区的原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达.方法:以Beagle犬基因组DNA为模板,设计特异性引物,经PCR技术扩增目的片段后,克隆到pMD18-T载体上,双酶切鉴定以后将目的基因亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1上,转化到E.coli DH5α,筛选阳性克隆,DNA测序检测插入序列的正确性.将测序正确的重组表达质粒pGEX-4T-1-cMC3R转化到E.coli BL21内,经IPTG诱导后,利用Western blot检测犬黑皮质素受体3融合蛋白的表达.结果及结论:成功构建重组表达质粒pGEX-4T-1-cMC3R,经DNA测序证实插入序列与Genebank上公布的序列一致.此重组体经诱导后能在E. coli BL21内表达犬黑皮质素受体3融合蛋白,为进一步获取犬黑皮质素受体3的单克隆抗体奠定物质基础,也为研究大黑皮质素受体3蛋白的结构和生理功能提供帮助.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	巴彩凤	辽宁医学院实验动物中心	91	369	10.0	14.0
2	谢建中	辽宁医学院实验动物中心	7	39	3.0	6.0
3	王光川	辽宁医学院实验动物中心	11	30	3.0	5.0