ICR小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养及饲养层制备

• 作者: 方驰华 胡海北 郝建志 陈霞
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 胚胎成纤维细胞 丝裂霉素C 饲养层 胚胎干细胞 诱导多能性干细胞
• 年，卷（期）: 2010,（23）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 4299-4302
• 分类号: R394.2
• 字数: 5359字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.23.027

摘要

背景:小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层能有效促进胚胎干细胞及诱导多能性干细胞增殖并维持其未分化特性和多潜能性,且效果优于无饲养层单独添加一些细胞因子,而且可以为上述两种细胞提供类似的胚胎发育环境.目的:建立稳定高效的ICR小鼠胚胎成纤维细胞饲养层培养体系,用于培养人胚胎干细胞及诱导多能性干细胞.方法:使用胰蛋白酶消化法分离ICR小鼠胚胎成纤维细胞,观察不同的胰蛋白酶水平及消化时间对获取小鼠胚胎成纤维细胞的量及其增殖活性的影响;利用不同质量浓度丝裂霉素C处理小鼠胚胎成纤维细胞1,1.5,2,2.5,3,3.5 h制备饲养层细胞,MTT法检测其增殖活性,探索其制备饲养层的最佳条件.结果与结论:分离ICR小鼠胚胎原代成纤维细胞最佳胰蛋白酶浓度为0.05%,消化时间为12～15 min,丝裂酶素最佳作用质量浓度和时间为10 mg/L作用2.5 h,成纤维细胞饲养层可以维持8～12 d.0.05%胰蛋白酶消化15～20 min效果优于0.15%,0.25%胰蛋白酶消化;10 mg/L丝裂霉素C处理胚胎成纤维细胞2.5 h能有效抑制其增殖,表明该条件下的饲养层细胞能很好的支持胚胎干细胞及诱导多能性干细胞生长.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	方驰华	南方医科大学附属珠江医院肝胆一科	208	2542	28.0	37.0
2	陈霞	南方医科大学附属珠江医院超声诊断科	18	62	4.0	7.0
3	郝建志	南方医科大学附属珠江医院肝胆一科	3	37	3.0	3.0
4	胡海北	南方医科大学附属珠江医院肝胆一科	4	38	3.0	4.0