制作胚胎干细胞饲养层细胞条件的优化

• 作者: 张万里 李伟 李航 林学科 王国斌 翟荣林 陶凯雄
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 小鼠胚胎成纤维细胞 胚胎干细胞 饲养层细胞 丝裂霉素 锥虫蓝
• 年，卷（期）: 2010,（36）
• 页码范围: 6768-6771
• 分类号: R394.2
• 字数: 4339字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.36.026

摘要

背景:研究表明小鼠胚胎成纤维细胞的制作受多种因素的影响.目前对这些因素的研究均建立于半经验的基础上,缺乏客观定量的数据支持.目的:对小鼠胚胎成纤维细胞制作胚胎干细胞饲养层细胞条件进行优化.方法:用两种不同方法从孕13.5 d昆明小鼠胚胎中分离胚胎成纤维细胞,采用锥虫蓝染色计数,比较两种分离方法在细胞活性和数量方面的差异.对分离得到的胚胎成纤维细胞用0.05%胰酶在室温下消化不同时间,分析胰酶消化时间解离贴壁细胞能力和其对细胞活性影响;采用梯度浓度国产丝裂霉素灭活饲养层细胞2 h和2.5 h并制作细胞生长曲线,探索丝裂霉索最佳浓度和处理时间;通过不同冻存方法比较复苏后胚胎成纤维细胞活性,筛选出适合小鼠胚胎成纤维细胞最佳冻存方法.结果与结论:胚胎成纤维细胞对胰酶极其敏感,短时间多次消化法方法显著提高细胞活性和数量;室温下4～6 min胰酶消化时间有利于保存细胞活性:10 mg/L 2.5 h和20 mg/L 2 h丝裂霉素灭活适合制作饲养层细胞;程序性降温使细胞更能适应温度变化,显著提高解冻后细胞活性和数量.