Bcl-x微基因及其突变微基因的构建与鉴定

• 作者: 李静 熊火梅 王小中 王彩纹 章海斌 肖芸 黄波
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 微基因 突变微基因 选择性剪接 Bcl-x 顺式作用原件
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 289-293
• 页数: 5页
• 分类号: R318
• 字数: 3998字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.02.023

摘要

背景:Bcl-xL/Bcl-xS比值的增高与肿瘤的发生密切相关,其机制尚未阐明.Bcl-x微基因是研究其选择性剪接机制的重要工具.目的:构建人类凋亡相关基因Bcl-x的微基因及其突变微基因,为进行Bcl-x基因选择性剪接方面的研究打下基础.方法:首先采用PCR法从人白血病细胞K562基因组DNA中扩增出Bcl-x基因外显子2及内含子2的5'部分序列片段,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(-)中,然后扩增出Bcl-x基因内含子2的3'端及外显子3部分序列,定向插入上一片段下游,构建成pcDNA3.1(-)-bcl-x微基因,测序鉴定无误后,用pcDNA3.1(-)-bcl-x微基因瞬时转染HL-60,通过RT-PCR方法对其在细胞内表达作进一步鉴定.另外,以pcDNA3.1(-)-bcl-x微基因为模板,利用反向PCR法构建突变微基因pcDNA3.1(-)-bcl-x-CRCE1(M).结果与结论:以人白血病细胞K562基因组DNA为模板,P1和P2为引物,经PCR扩增得约686 bp的目的片段;以P3和P4为引物扩增出约178 bp的目的片段.微基因pcDNA3.1(-)-bcl-x分别经Xba Ⅰ和Eco R Ⅰ双切、Xba Ⅰ和Xho Ⅰ双切鉴定均得到预期的片段,突变微基因pcDNA3.1(-)-bcl-x-CRCE1(M)经EcoR Ⅰ单酶切后,均得到预期片段,测序结果正确,表明成功构建人类凋亡相关基因Bcl-x的微基因及其突变微基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王小中	南昌大学第二附属医院检验科	67	204	9.0	12.0
2	李静	南昌大学第一附属医院检验科	148	949	16.0	23.0
3	黄波	南昌大学第二附属医院检验科	31	62	4.0	6.0
4	章海斌	南昌大学第二附属医院检验科	15	46	4.0	6.0
5	熊火梅	南昌大学第二附属医院检验科	10	23	3.0	4.0
6	肖芸	南昌大学第二附属医院检验科	9	23	3.0	4.0
7	王彩纹	南昌大学第二附属医院检验科	6	6	2.0	2.0